本篇文章给大家谈谈用动物阳性血清做wb的用动抗体时血清稀释多少倍，以及动物血清是物阳物血抗体还是抗原对应的知识点，希望对各位有所帮助，性血血清稀释不要忘了收藏本站喔。清做清抗
本文目录一览：
- 1、抗多少western一抗和二抗的体时体还稀释倍数一般是多少?
- 2、做WB时羊抗鼠二抗的倍动稀释比例一般是多少
- 3、WB一抗用什么稀释
western一抗和二抗的稀释倍数一般是多少?
抗体说明书上都会有推荐的稀释倍数。上网查一下，用动有很多protocol。物阳物血一般一比几百到一万都有，性血血清稀释依抗体而定。清做清抗可以4度过夜，抗多少这样染色效果好。体时体还二抗一般较便宜，倍动一般1：50到1：200多。
例如如果建议做Western时，一抗稀释比例是1：1000，那也就是说，1ul的抗体要加999uL的封闭液。这样得到就是1：1000的抗体稀释液了，可以用于实验。
有些时候也有一定的经验的：我用的是SANTA CRUZ的抗体，一抗建议的稀释比是1：200－1000，我用的是1：400效果挺好的。周围的人用的这个公司的其他一抗也是建议这个稀释比，他们也是稀释成了1：400，效果也挺好的。
试剂公司有一抗和二抗稀释液买，这个比较好，可以反复用几次（用完4度保存）。我们做的时候（其它一些人也是这样），有时用TBST，效果也可以。
以一块膜为例，封闭5ml+稀释一抗4ml+稀释二抗4ml，需要13ml，则配制15ml。 5% BSA溶液(w/v)：配制15ml 5% BSA溶液(w/v)，称取0.75g BSA晶体，溶于15mlTBST中，漩涡振荡器混匀，现用现配，4℃保存(若目的蛋白为磷酸化蛋白时配制)。
该步骤及之后步骤都需要避光操作。二抗稀释倍数约为1：100-1：200。复染核：滴加DAPI或Hochest孵育5-10min（避光操作），对样品进行染核，PBST 浸洗4次，每次5min。拍片：在共聚焦显微镜或荧光显微镜下观察采集图像。
做WB时羊抗鼠二抗的稀释比例一般是多少
1、一般根据抗体的特异性和亲和度。一抗的浓度范围比较大，从1：200到1：1000都有，这个要多做几次才能确定。二抗的稀释倍数打，一般用1：5000到1：10000就可以了。
2、以一块膜为例，封闭5ml+稀释一抗4ml+稀释二抗4ml，需要13ml，则配制15ml。 5% BSA溶液(w/v)：配制15ml 5% BSA溶液(w/v)，称取0.75g BSA晶体，溶于15mlTBST中，漩涡振荡器混匀，现用现配，4℃保存(若目的蛋白为磷酸化蛋白时配制)。
3、可以选用山羊抗小鼠的Ig或IgG1的二抗。正确使用：也需要重新选择稀释比例。一般供应商提供稀释比例从1：10稀释度始，作5倍比稀释。
WB一抗用什么稀释
1、建议起始浓度1：200开始（当然你也可以1：100，如果你的背景不高的话），倍比稀释，不是再做1：100-1：1000稀释，注意了。其实没有必要分装，一般都会添加保护剂的。如果你一定要分装，建议原液分装或是10稀释后分装。
2、可以用加了脱脂奶粉的封闭液，也可以用TBST液。如果显色用的是红外荧光二抗，则只能用TBS液稀释。
3、wb抗体用5%的脱脂奶粉（1‰TBST溶液）或者1%的BSA（1‰TBST溶液）配置，可以先让抗体与奶粉或BSA蛋白非特异结合，就不会与PVDF膜上的蛋白结合了。
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